48  DNA条带分析

电泳条带强度值分析

Published

August 30, 2025

1. 电泳条带强度值分析是常规

核酸和蛋白的电泳是生物学中常用/常规的实验方法。

通过对电泳胶上条带的强度值进行分析,可以定量比较不同条带的(相对)表达水平。

但电泳胶的拍照,涉及到曝光时间的选择。曝光时间越长,条带越清晰,但也可能出现条带过曝的情况。

比如曝光时间过长,条带颜色饱和(即,组成条带的有些像素光强度达到最大值),会不会影响基于光强度的定量分析,特别是涉及不同条带的相对光强度分析比较时?

2. 流程和实例测试

通过该流程可知:

  • 随着曝光时间的增加,upper_band的光强度逐渐增加,但在Exposure 5达到完全饱和(第2个方框的表格的“Upper_band_sum_corrected”列)。

  • 随着曝光时间的增加,lower_band的光强度逐渐增加(第2个方框的表格“Lower_band_sum_corrected”列))。

  • 随着曝光时间的增加,upper_band与lower_band的光强度比值逐渐减小(第2个方框的表格“Band_ratio”列,第3个方框的柱状图)。

    • 同一个胶,upper_band和lower_band的光强度比值应该是恒定的,不应该随着曝光时间的增加而变化

通过分析upper_band和lower_band像素光强度(第4个方框),发现:

说明:若像素达到饱和(即,像素光强度达到最大值),则该像素显示为白色;否则,显示为黑色。

  • Exposure 1的像素光强度均较低,几乎未出现像素光强度饱和现象

  • Exposure 2 - 5的像素出现严重的像素光强度饱和问题,导致基于此的光强度无法真实反映条带的实际水平。

因此,exposure 1的upper_band与lower_band的光强度比值,最接近真实值。

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